本研究中，根据生物电子等排原理，通过替换异噁唑啉类杀虫剂分子中的芳环，同时修饰尾部酰胺基团，期望发现具有优异杀虫效果的新型异噁唑啉类杀虫先导化合物。以3，5-二氯苯硼酸、5-溴-3-甲基-2-吡啶甲酸甲酯和5-溴-2-吡啶甲酸甲酯等为原料，经7步反应设计合成了6个异噁唑啉类衍生物，并测试了其对果蝇（drosophila melanogaster）和玉米螟（pyrausta nubilalis）的室内杀虫活性。
1 实验部分
1.1 试剂与仪器
无水碳酸钾、2-溴-3，3，3-三氟-1-丙烯、3，5-二氯苯硼酸、四（三苯基膦）钯、5-溴-3-甲基-2-吡啶甲酸甲酯、5-溴-2-吡啶甲酸甲酯、氰化亚铜、盐酸羟胺、醋酸钠、亚硝酸钠、盐酸、氢氧化钠、叠氮磷酸二苯酯、2-氨基-N-（2，2，2-三氟乙基）-乙酰胺盐酸盐、甘氨酸甲酯盐酸盐、甲氧胺盐酸盐、三乙胺（triethylamine）、N，N-二甲基甲酰胺（N，N-dimethylformamide，DMF）、四氢呋喃（tetrahydro-furan）、石油醚（petroleum ether， 60~90 ℃）、乙酸乙酯（ethyl acetate）、甲醇、蒸馏水等（均为分析纯，国药集团化学试剂有限公司、上海毕得医药有限公司等）。实验过程中无氧条件的反应均选用氩气保护，层析柱纯化所用硅胶粉粒径为40~45?μm。JNMA-400型核磁共振仪，日本电子株式会社；XEVO/SYNAPT G2型质谱仪，美国Waters公司，1290型质谱仪，安捷伦科技有限公司。
1.2 杀虫活性测试材料
供试药品为6个目标化合物G1-G6、氟虫腈（fipronil）；培养板、塑料容器、泡沫塞、注射器、移液管、人工饲料等；果蝇成年雌虫、玉米螟三龄幼虫；供试化学试剂为蔗糖、二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide， DMSO），试剂均为分析纯。
1.3 目标化合物的合成路线
以3，5-二氯苯硼酸、5-溴-3-甲基-2-吡啶甲酸甲酯和5-溴-2-吡啶甲酸甲酯等为原料，经7步反应设计合成了6个异噁唑啉类衍生物，其合成路线如图1所示。
1.3.1 中间体1，3-二氯-5-（1-三氟甲基-乙烯基）-苯（3）的合成 依次将3，5-二氯苯硼酸（1.90?g， 10?mmol）、2-溴-3，3，3-三氟-1-丙烯（1.91 g， 11 mmol）、碳酸钾（2.76?g， 20?mmol）和四（三苯基膦）钯（0.17?g， 0.15?mmol），加入到100?mL的双口圆底烧瓶中，然后向其加入四氢呋喃30?mL，水15?mL，氩气置换3次，升温至90?℃回流反应5?h。反应完毕后，用乙酸乙酯15?mL萃取3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩。粗产品经硅胶柱层析纯化（洗脱剂：PE），分离得到2.04?g无色液体，收率85.0%。
1.3.2 中间体5-氰基吡啶-2-甲酸甲酯（5a）的合成 依次将5-溴吡啶-2-甲酸甲酯（2.15?g，10?mmol）和氰化亚铜（1.78?g， 20?mmol）加入到250?mL双口圆底口烧瓶中，加入30?mL DMF溶解，搅拌升温至170?℃回流反应7?h。反应完毕后冷却至室温，将反应液加入到氨水溶液中（200?mL）抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取（20?mL，3次），合并有机相后用蒸馏水（30?mL，3次）和饱和食盐水（15?mL，3次）洗涤，再用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，粗产品用乙酸乙酯重结晶、过滤、石油醚洗涤。分离得到1.06?g白色固体，收率65.4%。
1.3.3 中间体5-氰基-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯（5b）的合成 以5-溴-3-甲基-2-吡啶甲酸甲酯（2.29?g， 10?mmol）等为原料，参照化合物5a的方法合成，得到0.99?g白色固体，收率56.2%。
1.3.4 中间体5-［（Z）-氨基（羟氨亚基）甲基］吡啶-2-甲酸甲酯（6a）的合成 将化合物5a（1.62?g，10?mmol）和盐酸羟胺（1.38?g， 20?mmol）加入到250?mL单口圆底烧瓶中，加入60?mL甲醇溶解。加入三乙胺（2.92?mL， 21?mmol），升温至80?℃回流反应5?h。反应完毕后冷却到室温，减压浓缩除去溶剂，乙酸乙酯萃取（20?mL，3次）后合并有机相，用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩。粗产品经硅胶柱层析［洗脱剂：V（PE）/V（EA）= 4∶1］，分离得到1.47?g白色固体，收率75.4%。
1.3.5 中间体5-［（Z）-氨基（羟氨亚基）甲基］-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯（6b）的合成 以化合物5b（1.76?g， 10?mmol）等为原料，参照化合物6a的方法合成，得到1.78?g白色固体，收率85.2%。
1.3.6 中间体5-［（Z）-氯（羟氨亚基）甲基］吡啶-2-甲酸甲酯（7a）的合成 将化合物6a（1，95?g，10?mmol）加入100?mL单口烧瓶中，加入80?mL 12%?HCl溶解后，冰浴。另取亚硝酸钠（1.38?g，20?mmol），用少量水溶解，将其滴加入反应液，0~5?℃回流反应5?h。反应完全后，乙酸乙酯（20?mL，3次）萃取合并有机相，用饱和食盐水（10?mL，3次）洗涤，用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩得到2.1?g白色固体，收率98.1%。
1.3.7 中间体5-［（Z）-氯（羟氨亚基）甲基］-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯（7b）的合成 以化合物6b（2.09?g， 10?mmol）等为原料，参照化合物7a的方法合成，得到2.2?g白色固体，收率96.5%。
1.3.8 中间体5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］吡啶-2-甲酸甲酯（8a）的合成 依次将化合物7a（2.14?g， 10?mmol）、化合物3（3.6?g， 15?mmol）和15?mL DMF加入到100?mL的圆底烧瓶中，滴加三乙胺（2.78?mL， 20?mmol），搅拌升温至60?℃反应8?h。反应完毕后，加入15?mL蒸馏水继续搅拌1?h，乙酸乙酯萃取（20?mL，3次）后合并有机相，用蒸馏水（20?mL，3次）、饱和食盐水（20?mL，3次）洗涤，无水硫酸钠干燥有机相后过滤，滤液减压浓缩，粗产品经硅胶柱层析［洗脱剂∶V（PE）/V（EA）为40∶1］，分离得到3.21?g白色固体，收率76.8%。
1.3.9 中间体5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯（8b）的合成 以化合物7b（2.28?g， 10?mmol）等为原料，参照化合物8a的方法合成，得到3.38?g白色固体，收率78.2%。
1.3.10 中间体5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］吡啶-2-甲酸（9a）的合成 依次将化合物8a（1.25?g， 3?mmol）、氢氧化钠（0.48?g， 12?mmol）加入250?mL的圆底烧瓶中，加入100?mL甲醇、20?mL纯水，搅拌升温至50?℃反应3?h，反应完全后，减压浓缩除去甲醇，用乙酸乙酯萃取（20?mL，3次）后合并有机相，分别用蒸馏水（20?mL，3次）、饱和食盐水（20?mL，3次）洗涤，无水硫酸钠干燥有机相后过滤，滤液减压浓缩，得1.17?g白色固体，收率96.5%，所得化合物无需纯化可直接进行下一步反应。
1.3.11 中间体5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］-3-甲基吡啶-2-甲酸（9b）的合成 以化合物8b（1.30?g， 3?mmol）等为原料，参照化合物9a的方法合成，得1.23?g白色固体，收率98.1%，所得化合物无需纯化可直接进行下一步反应。
1.3.12 目标化合物G1-G6的合成 将上述中间体9a（0.4?g， 1?mmol）加入100?mL单口圆底烧瓶中，用10?mL DMF溶解，加入叠氮磷酸二苯酯（0.28?g， 1?mmol），冰浴后，缓慢滴加三乙胺（0.28?mL，2?mmol），反应1?h后移至室温条件（25?℃）下，分批加入2-氨基-N-（2，2，2-三氟乙基）-乙酰胺盐酸盐（0.38?g， 2?mmol），继续反应12?h。反应完毕后，加入20?mL蒸馏水继续搅拌20?min，用乙酸乙酯萃取（10?mL，3次）后合并有机相，分别用蒸馏水（20?mL，3次）、饱和食盐水（20?mL，3次）洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩得到灰色粗产品。粗产物用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂进行重结晶，得0.46?g白色固体，产率84.9%。目标化合物G2-G6参照上述方法合成。
1.4 杀虫活性测试
1.4.1 果蝇室内杀虫活性测定方法 将供试化合物和氟虫腈分别溶解在溶剂DMSO中，并用质量体积比20%蔗糖溶液配制成100?mg/L的待测化合物稀释液，每种待测化合物稀释液约需要5?mL，以添加相同量溶剂（DMSO）的质量体积比20%蔗糖溶液作为对照组。挑选生长一致且健康的果蝇成年雌虫待试，对照组果蝇喂养蔗糖溶液润湿处理的牙芯，实验组喂养含待测化合物蔗糖溶液润湿的牙芯，将每组10只大小均匀的雌性果蝇放置到各个容器中，用泡沫塞盖住容器并转移至适宜条件下饲养。经过48?h后统计果蝇死亡数。每个待测药物重复3次实验，统计各组死亡数，计算死亡率（式1）和校正死亡率（式2）。
[Pt%=死亡昆虫个数总测试昆虫个数×100] （1）
[P1%=Pt-P01-P0×100] （2）
式中，Pt代表实验组死亡率，P0代表对照组死亡率，P1代表校正死亡率。
1.4.2 玉米螟室内杀虫活性测定方法 将供试化合物和氟虫腈分别溶解在溶剂DMSO中，将母液与人工饲料混匀，制成含有100?mg/L待测药剂的人工饲料，以添加相同质量溶剂（DMSO）的饲料为对照。选取生长一致且健康的三龄幼虫待试，在培养板的每孔加入约1.0?g含有待测药剂的人工饲料作为实验组，放置20头三龄幼虫待试，将培养板放置适宜条件下饲养。经过48?h后统计玉米螟三龄幼虫的死亡数量。每个待测药物重复3次实验，统计各组死亡数，计算死亡率（式1）和校正死亡率（式2）。
2 结果与讨论
2.1 结构表征
合成的6个异噁唑啉类目标化合物G1-G6，其1H-NMR、13C-NMR和HRMS数据均与预期结构相符合，具体表征如下：
1，3-二氯-5-（1-三氟甲基-乙烯基）-苯（3）：无色液体，收率85.0%。1H NMR （400?MHz， CDCl3）： δ 7.43~7.39 （m，1H），7.34 （s， 2H），6.05 （s， 1H）， 5.82 （s， 1H）；MS（ESI）： m/z 242.25 （M+H）+。
中间体5-氰基吡啶-2-甲酸甲酯（5a）：白色固体，收率65.4%。1H NMR （400?MHz， CDCl3）： δ 9.00 （d， J = 4?Hz， 1H）， 8.25 （d， J = 8?Hz， 1H）， 8.15 （dd， J = 8， 4?Hz， 1H）， 4.04 （s， 3H）； MS（ESI）： m/z 163.10 （M+H）+。
中间体5-氰基-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯（5b）：白色固体，收率56.2%。1H NMR （400?MHz， CDCl3）： δ 8.77 （d， J = 4?Hz， 1H）， 7.90 （d， J = 4?Hz， 1H）， 4.00 （s， 3H）， 2.62 （s， 3H）； MS（ESI）： m/z 177.20 （M+H）+。
5-［（Z）-氨基（羟氨亚基）甲基］吡啶-2-甲酸甲酯（6a）：白色固体，收率为75.4%。1H NMR （400?MHz， DMSO-d6）： δ 10.10 （s， 1H）， 9.06~8.88 （m， 1H）， 8.20~8.18 （m， 1H）， 8.05 （d， J = 8 Hz，1H），6.10 （s， 2H），3.87 （s， 3H）； MS（ESI）： m/z 196.10 （M+H）+。
5-［（Z）-氨基（羟氨亚基）甲基］-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯（6b）：白色固体，收率85.2%。1H NMR （400?MHz， DMSO-d6）： δ 10.01 （s， 1H）， 8.76 （s， 1H）， 8.01 （s， 1H）， 6.04 （s， 2H）， 3.87 （s， 3H）， 2.48 （s， 3H）； MS（ESI）： m/z 210.00 （M+H）+。
5-［（Z）-氯（羟氨亚基）甲基］吡啶-2-甲酸甲酯（7a）：白色固体，收率为98.1%。1H NMR （400?MHz，DMSO-d6）： δ 12.99 （s， 1H）， 9.08 （d， J = 4?Hz， 1H）， 8.33 （m， 1H）， 8.15 （d， J = 8?Hz， 1H），3.91 （s， 3H）；MS（ESI）：m/z 215.00 （M+H）+。
5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］吡啶-2-甲酸甲酯（8a）：白色固体，收率76.8%。1H NMR （400?MHz， CDCl3）： δ 8.94 （s， 1H）， 8.20 （s， 2H，）， 7.51 （d， J = 4?Hz， 2H）， 7.44 （t， J = 2?Hz， 1H）， 4.12 （d， J = 16?Hz， 1H）， 4.03 （s， 3H）， 3.74 （d， J = 20?Hz，1H）；MS（ESI）： m/z 419.05 （M+H）+。
5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯（8b）：白色固体，收率78.2%。1H NMR （400?MHz， DMSO-d6）： δ 8.79 （d， J = 4?Hz， 1H），8.13（d， J =4?Hz， 1H）， 7.82 （t， J = 2?Hz， 1H），7.63（d， J =4?Hz， 2H）， 4.48 （d， J =16?Hz， 1H），4.36（d， J =20?Hz， 1H）， 3.89 （s， 3H）， 2.49 （s， 3H）； MS（ESI）： m/z 433.05 （M+H）+。
5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］-N-｛2-氧亚基-2-［（2，2，2-三氟乙基）氨基］乙基｝吡啶-2-甲酰胺（G1）：白色固体，收率84.9%。1H NMR （400?MHz， DMSO-d6）： δ 9.05 （t， J = 6?Hz， 1H）， 8.94 （d， J = 4?Hz， 1H）， 8.64 （t， J = 6?Hz， 1H）， 8.31 （m， 1H）， 8.12 （d， J = 8?Hz， 1H）， 7.80 （t， J = 4?Hz， 1H）， 7.62 （d， J = 4?Hz， 2H）， 4.60~4.30 （m， 2H）， 3.98 （d， J = 4?Hz， 2H）， 3.91 （m， 2H）； 13C NMR （101?MHz， DMSO-d6）： δ 169.9， 163.9， 156.3， 151.5， 147.4， 139.0， 136.5， 135.2， 130.8， 130.1， 126.5， 126.5， 126.1， 123.8， 122.5， 87.7， 87.4， 43.0， 42.6， 29.5； HRMS m/z： calcd for C20H14Cl2F6N4O3 （M+H）+ 543.042 5， found 543.042 4。
5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］-N-甲氧基吡啶-2-甲酰胺（G2）：白色固体，收率90.1%。1H NMR （400?MHz， DMSO-d6）： δ 12.22 （s， 1H）， 8.90 （s， 1H）， 8.31 （dd， J = 8， 4?Hz， 1H）， 8.11 （d， J = 8?Hz， 1H）， 7.83 （s， 1H）， 7.64 （s， 2H）， 4.56~4.36 （m， 2H）， 3.72 （s， 3H）； 13C NMR （101?MHz， DMSO-d6）： δ 160.9， 156.3， 151.5， 147.4， 139.0， 136.5， 135.2， 130.1， 126.5， 126.1， 122.7， 87.7， 87.4， 63.7， 43.0； HRMS m/z： calcd for C17H12Cl2F3N3O3 （M+H）+ 434.028 6， found 434.028 3。
［（｛5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］吡啶-2-基｝羰基）氨基］乙酸甲酯（G3）：白色固体，收率90.5%。1H-NMR （400?MHz， DMSO-d6）： δ 9.24 （t， J = 6?Hz， 1H）， 8.94 （s， 1H）， 8.31 （d， J = 8?Hz， 1H）， 8.12 （d， J = 8?Hz， 1H）， 7.80 （t， J = 2?Hz， 1H）， 7.62 （s， 2H）， 4.55~4.34 （m， 2H）， 4.06 （d， J = 4?Hz， 2H）， 3.64 （s， 3H）； 13C NMR （101?MHz， DMSO-d6）： δ 170.5， 164.1， 156.3， 151.3， 147.5， 139.0， 136.60， 135.2， 130.1， 126.6， 126.2， 125.6，122.6，87.7， 87.4， 52.3， 43.0， 41.5； HRMS m/z： calcd for C19H14Cl2F3N3O4 （M+H）+ 476.039 1， found 476.039 0。
5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］-3-甲基-N-｛2-氧亚基-2-［（2，2，2-三氟乙基）氨基］乙基｝吡啶-2-甲酰胺（G4）：白色固体，收率86.3%。1H NMR （400?MHz， DMSO-d6）： δ 8.92 （t， J = 6.0?Hz， 1H）， 8.78 （s， 1H）， 8.62 （t， J = 6?Hz， 1H）， 8.10 （s， 1H）， 7.82 （s， 1H）， 7.63 （s， 2H）， 4.49 （s， 1H）， 4.37 （s， 1H）， 3.98~3.89 （m， 4H）， 2.61 （s， 3H）； 13C NMR （101?MHz， DMSO-d6）： δ 170.1， 165.9， 156.2， 150.2， 144.5， 139.0， 135.2， 134.5， 130.1， 126.6， 126.2， 125.5， 123.8， 87.5， 87.2， 43.1， 42.5， 29.5， 19.8； HRMS m/z： calcd for C21H16Cl2F6N4O3（M+H）+ 557.058 2， found 557.058 1。
5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］-N-甲氧基-3-甲基吡啶-2-甲酰胺（G5）：白色固体，收率91.7%。1H NMR （400?MHz， DMSO-d6）： δ 10.22 （s， 1H）， 8.63 （d， J = 4?Hz， 1H）， 7.86 （d， J = 4?Hz， 1H）， 7.49 （s， 2H）， 7.43 （t， J = 2?Hz， 1H）， 4.09 （d， J = 20?Hz， 1H）， 3.89 （s， 3H）， 3.72 （d， J = 16?Hz， 1H）， 2.75 （s， 3H）； 13C NMR （101?MHz， DMSO-d6）： δ 170.6， 166.2， 156.2， 150.2， 144.6， 139.1， 139.0， 135.2， 134.4， 130.1， 126.2， 125.6， 87.5， 87.2， 52.2， 43.1， 41.3， 19.7； HRMS m/z： calcd for C18H14Cl2F3N3O3 （M+H）+ 448.044 2， found 448.043 7。
［（｛5-［5-（3，5-二氯苯基）-5-（三氟甲基）-4，5-二氢异噁唑-3-基］-3-甲基吡啶-2-基｝羰基）氨基］乙酸甲酯（G6）：白色固体，收率90.0%。1H NMR （400?MHz， DMSO-d6）： δ 9.08 （t， J = 6?Hz， 1H）， 8.76 （d， J = 2.0?Hz， 1H）， 8.08 （d， J = 2.0?Hz， 1H）， 7.81 （t， J = 2?Hz， 1H）， 7.61（d， J = 2?Hz， 2H）， 4.53~4.30 （m， 2H）， 4.01（d， J = 4?Hz， 2H）， 3.64 （s， 3H）， 2.57 （s， 3H）； 13C NMR （101?MHz， DMSO-d6）： δ 170.6， 166.1， 156.2， 150.1， 144.6， 139.1， 139.0， 135.2， 134.4， 130.1， 126.2， 125.6， 87.5， 87.2， 52.2， 43.1， 41.3， 19.7； HRMS m/z： calcd for C20H16Cl2F3N3O4 （M+H）+ 490.054 8， found 490.055 1。
2.2 杀虫活性
化合物G1-G6对果蝇和玉米螟的杀虫活性如表1所示。结果表明，在100?mg/L浓度下，部分化合物对果蝇表现出较好的杀虫效果，其中G1、G4和G5对果蝇的杀虫率均达100%；而化合物G2和G3则表现出较弱的杀虫活性，果蝇48 h的校正死亡率低于40%。进一步测试了目标化合物对鳞翅目害虫玉米螟的杀虫效果；结果表明，100?mg/L浓度下，化合物G1-G4表现出与果蝇相似的杀虫效果，其中化合物G1和G4杀虫效果较好，玉米螟48 h后的死亡率分别为84.56%和100.00%，化合物G2和G3抑制效果较差，死亡率小于10%。值得注意的是，化合物G5和G6对玉米螟表现出较差的杀虫效果，小于30%，这与对果蝇的测试结果大为不同。以上测试结果表明，异噁唑啉环3号位连接吡啶环的分子骨架可能保留较好的杀虫活性，并且吡啶环3号位甲基取代的异噁唑啉类衍生物倾向于表现出更好的杀虫效果（杀虫率：化合物G5 ≥ G2，G6＞G3 ）。另外化合物的酰胺脂肪长链连有给电子的酯基或甲氧基时，可能会降低对玉米螟的杀虫活性（杀虫率：化合物G5＜G4，G6 ＜ G4 ）。
表1 目标化合物在质量浓度100?mg/L条件下的杀虫活性
Tab. 1 Insecticidal activities of target compounds at 100?mg/L
[化合物 校正死亡率 / % 果蝇 玉米螟 G1 100.00 ± 0.00 84.56 ± 11.22 G2 33.70 ± 16.49 5.00 ± 4.08 G3 10.00 ± 8.16 3.42 ± 2.42 G4 100.00 ± 0.00 100.00 ± 0.00 G5 100.00 ± 0.00 5.00 ± 4.08 G6 92.96 ± 5.00 20.53 ± 7.82 氟虫腈 100.00 ± 0.00 100.00 ± 0.00 ]
注：数值为48?h测得的死亡率，n = 3。
3 结 论
本文通过7步反应合成了6个结构新颖的异噁唑啉类衍生物（G1-G6），并通过1H-NMR、13C-NMR和HRMS对目标化合物进行了结构表征。部分目标化合物在质量浓度100?mg/L条件下对果蝇和玉米螟表现出有效的杀虫活性，杀虫率达100%。活性测试结果表明，异噁唑啉环3号位连接吡啶环的分子骨架可能保留较好的杀虫活性，特别是吡啶环3号位有甲基取代的异噁唑啉类衍生物。另外化合物的酰胺脂肪长链连有给电子的酯基或甲氧基时，可能会降低杀虫活性。本研究为新型异噁唑啉类杀虫剂的设计与合成提供了重要参考