《武汉工程大学学报》 2009年07期
13-15
出版日期：2009-07-28
ISSN:1674-2869
CN:42-1779/TQ
几种药剂对草坪褐斑病菌的毒力测定
0引言草坪褐斑病（Rhizoctomia solani）是一种分布最广、危害最重的世界性草坪病害［1］，其病原是土壤传播的立枯丝核菌，该菌寄生很广，可侵染草地早熟禾、粗茎早熟禾、紫羊茅、细叶羊茅、高羊茅、多年生黑麦草、细弱剪股颖、狗牙根等250余种禾草植物［2］.该病主要侵染植物的叶、鞘、茎，导致腐烂、枯死，草坪受害出现几厘米至2米大小不等的近圆形枯草圈，由于中心病斑不断恢复，呈现中间绿，外边枯的“蛙眼”状斑，在清晨有露水或高湿时，枯草圈外缘常出现有新病株菌丝形成的暗绿至黑褐色浸润“烟圈”.病害发生后，可造成草坪大面积斑秃，极大破坏了草坪景观.为了有效防治草坪褐斑病，国内进行了不同药剂的毒力筛选与防效试验，出现了不尽一致甚至相互矛盾的研究结果［38］，这可能是由于侵染草坪的立枯丝核菌融合群不同造成的.有关不同药剂对R.Solani AG1IB融合群菌株的毒力测定与筛选工作没见报道，本实验进行5种不同药剂对R.Solani AG1IB融合群菌株毒力测定，旨在为有效防治草坪褐斑病，提供科学合理的用药依据.1实验部分1.1供试药剂质量分数为75%氯胺磷原药（75%Chloramine phosphorus TC），武汉工程大学化工与制药学院提供；质量分数为5%井冈霉素水剂（5%Jinggangmycin AS），武汉科诺生物科技有限公司生产；质量分数为4%农抗120水剂（4%Agricultural antibiotic 120 AS），武汉科诺生物科技有限公司生产；质量分数为50%多菌灵可湿性粉剂（50%Carbendazim WP,商品名：品翠），深圳诺普信农化股份有限公司生产；质量分数为75%百菌清可湿剂粉剂（75%Daconil WP,商品名：达霜宁），深圳诺普信农化股份有限公司生产.1.2供试菌株草坪褐斑病菌（Rhizoctomia solani AG1IB融合群），为华中农业大学植保系黄俊斌教授提供.1.3药剂抑菌率测定方法分别取一定量的以上5种供试药剂，制备一定浓度的母液，每种药剂分别用无菌水稀释成5个不同浓渡梯度.在无菌工作台上用无菌吸管吸取1 mL药液（以清水为对照）加入到7.5 cm培养皿中，再用无菌注射器加入9 mL熔化后的50～60 ℃的PDA培养基，使药剂与培养基混匀，冷却至室温.然后，向培养皿中接种直径5 mm的草坪褐斑病菌菌块，在28 ℃恒温培养箱中培养24～28 h，待对照接近长满培养皿时，用十字交叉法测量菌落直径，3次重复，取平均值，计算药剂的菌丝抑菌率.计算公式如下：
菌丝抑菌率%=对照菌落直径-处理菌落直径对照菌落直径×100%1.4毒力回归分析以药剂浓度对数值为自变量X，以菌丝抑菌率机率值为因变量Y，计算出毒力回归方程和相关系数r，根据回归方程求出抑菌中浓度EC50值.2结果与分析
2.1不同药剂对草坪褐斑病菌的菌丝生长抑制作用5种不同药剂，在不同浓度区间对草坪褐斑病菌的抑菌作用不同.生物杀菌剂质量分数为5%井冈霉素水剂和质量分数为4%农抗120水剂分别在200～4 000 μg/mL和31.3～8 000 μg/mL浓度区间，对草坪褐斑病菌有抑菌活性，其抑菌率分别为27.6%～81.0%和10.4%～73.4%.作为杀虫剂的专利产品75%氯胺磷原药，在312.5～5 000 μg/mL浓度区间，对草坪褐斑病菌也有抑菌活性, 其抑菌率为18.2%～72.8%.传统杀菌剂质量分数为50%多菌灵可湿性粉剂和质量分数为75%百菌清可湿性粉剂，对草坪褐斑病菌抑菌活性较高，分别在3.1～25.0 μg/mL和6.3～100 μg/mL浓度区间，其抑菌率分别为10.9%～85.4%和13.3%～85.6%（如表1所示）.表1不同药剂对草坪褐斑病菌的抑菌作用
Table 1Inhibition effect of 5 fungicides to Rhizoctomia solani AG1IB
井冈霉素
（Jinggangmycin）农抗120
（Agricultural antibiotic120）氯胺磷
（Chloramine phosphorus）多菌灵
（Carbendazim）百菌清
（Daconil）制剂质量浓度/
（μg/mL）抑菌率/
%制剂质量浓度/
（μg/mL）抑菌率/
%制剂质量浓度/
（μg/mL）抑菌率/
%制剂质量浓度/
（μg/mL）抑菌率/
%制剂质量浓度/
（μg/mL）抑菌率/
%20027.631.310.4312.518.23.110.96.313.640036.612523.862527.36.328.312.531.6666.745.350046.01 25043.112.557.12551.71 00057.82 00059.22 50064.818.069.75063.34 00081.08 00073.45 00072.825.085.410085.62.2不同药剂对草坪褐斑病菌的毒力回归分析5种不同药剂对草坪褐斑病菌的毒力测定结果如表2所示.从表2可知，质量分数5%井冈霉素AS、质量分数4%农抗120AS、质量分数为75%氯胺磷TC、质量分数50%多菌灵WP和质量分数75%百菌清WP对草坪褐斑病菌的EC50值.根据EC50的大小，EC50值越小，表明毒力越大，5种不同药剂对草坪褐斑病菌的毒力大小为：多菌灵>百菌清>井冈霉素>农抗120>氯胺磷.第7期韩新才，等：几种药剂对草坪褐斑病菌的毒力测定
武汉工程大学学报第31卷
表2不同药剂对草坪褐斑病菌抑菌毒力回归分析
Table 1Toxicity of 5 fungicides to Rhizoctomia solani AG1IB
药剂
（Fungicides）毒力回归方程
（Regression equation）相关系数
（r）抑菌中浓度
EC50/（μg/mL）井冈霉素（Jinggangmycin）
农抗120（Agricultural antibiotic 120）
氯胺磷（Chloramine phosphorus）
多菌灵（Carbendazim）
百菌清（Daconil）y=1.669 7+1.163 0x
y=2.636 5+0.784 9x
y=0.725 6+1.334 7x
y=2.490 0+2.476 0x
y=2.568 8+1.717 8x0.995 6
0.992 9
0.996 5
0.996 6
0.993 2730.3
1 016.2
1 589.0
10.3
26.0结果表明，化学杀菌剂多菌灵、百菌清的毒力大于生物杀菌剂井冈霉素和农抗120，这与农业生产上许多病原菌对多菌灵、百菌清产生抗性，致使防效下降不同，说明草坪病害防治的用药量与用药频率还远不及农业病害防治，草坪褐斑病菌对多菌灵、百菌清的抗性较小.生物农药井冈霉素和农抗120虽然毒力小于化学农药多菌灵和百菌清，但这2种农药对草坪褐斑病具有明显的毒力和防效，而且与环境相容，环保无公害，在草坪褐斑病防治上具有一定的应用价值.化学农药氯胺磷作为杀虫剂获得国家发明专利［9］，2008年因其对水稻纹枯病具有杀菌活性和防效也获得国家发明专利授权［10］，本实验表明，氯胺磷对草坪褐斑病菌也具有一定的抑菌效果和毒力，可与其他杀菌剂联合使用，既杀虫又杀菌，具有一定的应用前景.3讨论为了有效防治草坪褐斑病，国内学者对草坪褐斑病进行了不同的药剂毒力测定与筛选，但无统一结论，如：蒋家珍等［4］研究认为，甲基托布津对草坪褐斑病菌抑菌效果好，而季延平等［5］研究表明，甲基托布津抑菌效果差；钱振官等［6］研究结果表明，多菌灵对草坪褐斑病菌抑菌效果最佳，而季延平等［5］和张金林等［7］的研究认为，多菌灵抑菌效果差.笔者认为，造成这些研究结果不一致甚至矛盾的原因，可能与草坪褐斑病病原菌的复杂性有很大关系.据报道［2］，我国草坪褐斑病的病原菌包括双核菌丝、多核菌丝和单核菌丝，国际上确认的立枯丝核菌种内菌丝融合群有18个，不同融合群都能侵染草坪植物，其中R.solani AG1IA融合群致病力最强［1］，但不同的融合群对杀菌剂的敏感性不同［3］，如果供试的草坪褐斑病的菌株为不同的融合群，其研究结果必然存在差异.因此，有必要对草坪褐斑病菌的不同融合群进行药剂的毒力测定与筛选，为田间草坪褐斑病防治，提供有针对性的科学合理的用药指导，防止盲目用药，提高防治效果.本实验研究了2种化学杀菌剂、2种生物杀菌剂和1种化学杀虫杀菌剂对草坪褐斑病菌AG1IB融合群的毒力，上述5种药剂均有一定的抑菌效果，其中农抗120和氯胺磷为首次报道，该研究结果为田间有效防治由AG1IB融合群引起的草坪褐斑病提供了一定依据，其田间防治试验有待进一步研究.