《武汉工程大学学报》 2011年12期
27-29
出版日期：2011-12-30
ISSN:1674-2869
CN:42-1779/TQ
环氧啉含量的HPLC法测定方法
0引言环氧啉（Cycloxylidin）其化学名称为1(2，3环氧丙基)N硝基亚咪唑烷2亚胺，它是基于计算机辅助药物分子设计（CADD）方法，利用CoMFA模拟结果，以4个含不同药效团的活性中间体为原料合成的一系列新烟碱类化合物中杀虫活性突出的创新的化合物，环氧啉杀虫谱广，防治效果与吡虫啉相近［1］，是第四代新烟碱类杀虫剂.新烟碱类杀虫剂的结构主要由4部分组成：（1）杂环基团；（2）桥链部分；（3）功能基团，主要有硝基烯胺(—N—C(or N)CH—NO)、硝基胍(—N—C(or N)N—NO)，氰基脒(—N—CHN—CN)三类；（4）氮环状或开环部分，环的大小对杀虫剂生物活性影响很大，一般五元环或六元环的活性较高.新烟碱类杀虫剂是乙酰胆碱受体抑制剂，主要作用于昆虫神经，其作用机制独特，高效，低毒，对环境安全，是取代高毒有机磷，有机氯类杀虫剂的最佳品种［2］.作为第一代的新烟碱类杀虫剂的吡虫啉，其是目前全球市场上销量最大杀虫剂品种.但是长期使用单一化合物，会使害虫产生抗性，吡虫啉也不例外.文献报道，吡虫啉的抗性的形成可能与害虫解毒能力提高和靶标部位对毒素敏感性降低有关［3］.另外，吡虫啉由于含有吡啶环，生产过程中会产生大量的污染物，难以治理.环氧啉可以有效的克服以上缺点，生产成本仅为吡虫啉的1/3，且与吡虫啉具有相似的杀虫谱及杀虫效果，且持效性高于吡虫啉，毒性比吡虫啉更低，结构新颖，作为第四代烟碱杀虫剂，具有较大的开发前景.根据环氧啉的结构，虽有一些方法可检测，但鉴于环氧啉为新开发的化合物，本文参考并查阅了相关的烟碱类杀虫剂吡虫啉的高效液相色谱法［4］，经过实验采用了合适的色谱条件，直接测定环氧啉的含量.本方法不需要繁杂的化学操作，简便快速，重复性极令人满意.经验证该方法对实际复杂样品的分离效果好，可靠性高,抗干扰性强.1实验部分1.1试剂与仪器甲醇为色谱纯；水为二次蒸馏水；环氧啉标样［5］（自制，含量为98.15%）；样品为环氧啉原药及10%可湿性粉剂.Waters2695液相色谱仪；二极管阵列检测器.1.2色谱条件流动相为甲醇水（2575，V/V）溶液，流速为1.0 mL/min，C18色谱柱（C18250 mm×4.6 mm,5 μg/mL），检测波长为220 nm，柱温为室温，进样量10 uL.1.3对照品溶液精密称取干燥至恒重的环氧啉标样0.108 0 g，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，用流动相定容至刻度，摇匀，得贮备液.1.4样品溶液精密称取环氧啉原药0.105 2 g，置于50 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并用流动相定容至刻度，摇匀.准确移取该溶液10.0 mL置于50 mL的容量瓶中,并用流动相定容至刻度，即为1#样品溶液.精密称取质量分数10%可湿性粉剂0.757 0 g，置于50 mL的容量瓶中，用甲醇溶解，在恒定的温度下超声5 min，用流动相定容至刻度，摇匀.然后准确移取该溶液10.0 mL置于50 mL的容量瓶中,并用流动相定容至刻度(注：移取时用孔径0.45 μm的过滤膜进行过滤)，作为2#样品溶液.2结果与讨论2.1方法耐用性的考察在上述色谱条件下，改变流动相的配比，采用相同的色谱柱，考察条件的耐用性，将流动相甲醇水分别设定为3565，3070，2575，2080，1585，1090时，结果显示甲醇水之比为2575时，环氧啉与其杂质的分离度高，选择性也较好，并符合溶剂选择性分类三角形图.2.2线性关系研究准确移取对照品贮备液1，2，3，4，5，6，7，8 mL分别置于25 mL的容量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，每次进样10 μL，以峰面积为纵坐标，相应的浓度为横坐标进行线性回归，结果见表1.第12期戴丽雯，等：环氧啉含量的HPLC法测定方法
武汉工程大学学报第33卷
表1环氧啉标准工作曲线测定结果
Table 1Determination result of Epoxy morpholine about the working graph环氧啉质量浓度/
（μg/mL）43.286.4129.6172.8216259.2302.4345.6峰面积19.878 914.869 826.020 230.572 737.822 144.554 952.078 760.819 5峰面积27.985 615.063 423.578 631.234 538.604 146.552 353.678 559.587 9平均值8.928 714.966 624.799 430.903 638.238 645.553 652.878 660.203 7由表1数据可知，以环氧啉浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，线性回归方程为：Y=1.603 593+0.169 560 5X，相关系数为0.999 92.结果表明，环氧啉检测限为43.2~345.6 μg／mL时，峰面积与浓度成良好的线性关系.对照品溶液色谱图见图1.图1标准溶液的色谱图
Fig.1HPLC chromatogram of standard solution2.3精密度及重现性取环氧啉对照品稀溶液，连续进样8次，每次进样10 μL，环氧啉的峰面积积分值的RSD为0.908%.分别取1#样品稀溶液,2#样品稀溶液，每次进样10 μL，重复进样8次，环氧啉的峰面积积分值的RSD分别为0.912%，0.895%.2.4回收率实验准确称取环氧啉原药0.108 0 g，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并用流动相定容至刻度，分别取10 mL，置于3个100 mL的容量瓶中，再分别取20 mL加入另外3个100 mL的容量瓶中，然后按顺序精密加入0.5，1，2，4，6，8 mL的对照品贮备液，用水稀释至刻度，摇匀，进样，读取峰面积，从标准曲线上求得含量并计算回收率.其结果见表2.表2环氧啉回收率实验（n=6）
Table 2Recovery test of Epoxy morpholine样品/
mg加入量/
mg测得量/
mg回收率/
%平均回收
率/%RSD/%10.800.5511.3498.19%10.801.1011.91100.91%10.802.2012.9899.09%21.604.4025.9999.78%21.606.6028.21100.16%21.608.8030.3899.78%99.65%0.878%2.5样品稳定性实验将环氧啉原药和质量分数10%可湿性粉剂分别储存在冰箱内7，14，21，28 d，按上述方法测定，分析结果显示环氧啉原药和质量分数10%可湿性粉剂的含量无明显变化.2.6样品的含量测定分别取1#样品，2#样品，分别在实验的色谱条件下（C18色谱柱，25%甲醇-75%水的流动相，检测波长220 nm，流速1.0 mL/min，室温）测定环氧啉含量，进样10 μL，读取峰面积，按外标法计算含量，结果见表3.表3样品分析
Table 3Analysis of samples样品编号检测量平均含量1#样品83.44%82.53%85.97%86.23%88.45%85.32%2#样品8.74%10.42%11.46%8.03%9.45%9.32%图2，3分别为1#样品溶液的色谱图，2#样品溶液的色谱图.图21#样品溶液色谱图
Fig.2HPLC chromatogram of 1# sample solution图32#样品溶液色谱图
Fig.3HPLC chromatogram of 2# sample solution3结语本研究通过实验建立的环氧啉含量的HPLC的测定方法，得到了理想的峰形及高的分离度.该分析法准确，方便.本研究最佳色谱条件为：C18色谱柱（C18250 mm×4.6 mm,5 μg/mL），流动相为甲醇—水（2575,V/V），流速为1.0 mL/min，室温，220 nm检测波长.样品中环氧啉原药的平均回收率是99.65%，其RSD为0.878%.参考文献：