《武汉工程大学学报》 2009年12期
21-23
出版日期：2009-12-28
ISSN:1674-2869
CN:42-1779/TQ
HPLC法测定非诺贝特软胶囊的有关物质及含量
0引言非诺贝特(fenofibrate)为氯贝丁酯类降血酯药，能抑制羟甲基戊二酰辅酶A(HMG．CoA)还原酶，从而减少胆固醇合成，临床常用于治疗高甘油三酯血症、高胆固醇血症和混合性高脂血症，对老年人动脉粥样硬化、心脑血管疾病的防治有重要意义［1］.非诺贝特软胶囊剂具有生物利用度高的特点，经临床研究结果证明与进口非诺贝特胶囊（法国Fournier公司生产的Lipahyl胶囊）生物等效.本实验建立了高效液相色谱法对非诺贝特软胶囊中的有关物质及含量进行分离、测定.能准确检测样品中的有关物质、主要降解产物非诺贝特酸［25］、非诺贝特酚.操作简便，方法可行，准确度高.
1实验部分
1.1仪器高效液相色谱仪（日本岛津）LC10A泵，SPD10A检测器；UV240型紫外可见分光光度仪（日本岛津）．
1.2材料与试剂非诺贝特对照品（开封制药厂提供），批号：20061003，HPLC法检测纯度为99.7%；非诺贝特软胶囊（浙江爱生药业有限公司提供），批号：20070109、20070110、20070111；甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸、盐酸为分析纯．
1.3实验方法
1.3.1溶液的制备a.供试品溶液的制备取20粒非诺贝特软件囊内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于非诺贝特20 mg），加乙腈微温(40 ℃)提取4次，每次23 mL，合并提取液，置100 mL量瓶中，分别加乙腈至刻度，摇匀，作为供试品溶液.b.对照品溶液的制备另取非诺贝特对照品各适量，精密称定，加乙腈溶解并稀释制成的每1 mL约含非诺贝特对照品1 mg 溶液，作为对照品溶液.c.色谱条件用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂；以水乙腈（30∶70）（v/v）用磷酸调节PH 2.5为流动相；流速1 mL·min-1；检测波长286 nm.d.测定与计算量取供试品溶液、对照品溶液各20 uL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，测得非诺贝特软件囊中非诺贝特的含量.
2结果与讨论
2.1线性关系考察 准确称取非诺贝特对照品40.71 mg，置于100 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，分别精密量取上述溶液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、10.0 mL分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀.照1.2.1项下色谱条件测定，以峰面积（A）为纵坐标，样品浓度（C）为横坐标，进行线性回归，其方程为:A=5.227 8×108 C－0.002 9，r=0999 9.表明非诺贝特在40.7～407.1 ug·mL-1质量浓度范围内与峰面积成良好的线性关系.
2.2定量限与检测限 将1.2.1项下最低浓度溶液逐步稀释，当信噪比（S/N）为10时，溶液浓度为0.06 ug·mL-1，即定量限为1.2 ng；当信噪比（S/N）为3时，溶液浓度为0.02 ug·mL-1，即检测限为0.4 ng.
第12期李嘉宇，等：HPLC法测定非诺贝特软胶囊的有关物质及含量
武汉工程大学学报第31卷
2.3回收率与精密度实验按处方比例配制空白辅料，精密称取9份，每份约35 mg，分别置烧杯中，各加入非诺贝特对照品9份，称样量为20 mg×(1±20%），搅匀，加乙腈微温(40 ℃)提取4次，每次23 mL，合并提取液，置100 mL量瓶中，分别加乙腈至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取非诺贝特对照品20.14 mg，置100 mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液.照1.2.1项下色谱条件测定.按外标法以峰面积计算回收率.平均回收率为998%.对照品溶液连续进样5次，获得日内精密度，RSD=0.8%(n=5)；连续进样5 d，获得日间精密度，RSD=1.2%(n=5).
2.4专属性实验取非诺贝特软胶囊内容物适量，加乙腈微温(40 ℃)提取4次，使非诺贝特溶解并稀释制成每1 mL中约含1 mg的溶液，作为供试品溶液；另取非诺贝特、非诺贝特酸、非诺贝特酚对照品各适量，精密称定，加乙腈溶解并稀释制成的每1 mL约含非诺贝特对照品1 mg、非诺贝特酸、非诺贝特酚各10 ug的溶液，作为对照溶液；取供试品溶液25 mL置恒温光照箱中（5 ℃，4 500 lx），照射5 d；取供试品溶液置25 mL量瓶中，水浴加热1 h，放冷至室温，加乙腈至刻度，摇匀；分别取本品内容物适量，精密称定置100 mL量瓶中，分别加0.1 mol·L-1盐酸液、0.1 mol·L-1氢氧化钠液各10 mL，加乙腈适量，摇匀，水浴加热1 h，放冷至室温，加乙腈至刻度，摇匀，分别作为经光、热、酸、碱破坏样液，照1.2.1项下色谱条件测定.结果表明，非诺贝特对热、酸较稳定，经光破坏产生3个小杂质，保留时间分别为3.5、4.6和205 min，经碱破坏产生的杂质较大，主要杂质保留时间为4.6 min；证实该色谱条件能有效分离并检出降解产物.
2.5溶剂及空白内容物的干扰实验分别以乙腈及空白内容物乙腈提取，照1.2.1项下色谱条件试验，除1.5～3 min有细小的基质及溶剂峰外，无其他色谱峰，表明溶剂及基质对测定无干扰.
2.6样品含量测定用1.2.7项下方法处理样品，用1.2.1项下色谱条件测定.结果如表1所示.A.非诺贝特对照品B.非诺贝特酚与非诺贝特酸对照品C.碱破坏样品图1非诺贝特软胶囊专属性试验结果HPLC图谱
Fig.1Specification Test Result of HPLC Graph of Fenofibrate softspecification
表1样品质量分数测定结果
Table 1Results of sample assay
样品批号质量分数/%RSD/%2007010999.50.720070110101.30.520070111100.70.6注：n=3.3结语a. 经对水乙腈系列流动相、水甲醇系列流动相筛选，选择水乙腈（30∶70）(v/v)，用磷酸调节PH2.5为流动相，非诺贝特峰与相邻杂质峰分离效果最好（分离度为3以上），主峰出峰时间适中（11~14 min），主峰峰形对称（拖尾因子T=101）.b. 对用乙腈溶解并稀释制成每1 mL中约含12 ug的非诺贝特对照品溶液在200 nm至400 nm波长范围内扫描，最大吸收波长为286±1 nm，选择286 nm为检测波长.
c. 主药非诺贝特以微粒形式分散在软胶囊基质中，分别用甲醇、乙醇及乙腈为溶剂进行提取试验，乙腈提取效果最好.
d. 通过日内、日间精密度试验可知配制好的样液具有较长的稳定时间，可达5 d.
e. 由专属性试验结果提示：杂质非诺贝特酸的相对保留时间为0.33，非诺贝特酚的相对保留时间为0.25，为主要有关物质及降解产物.